恒一生物科研技術(shù)團(tuán)隊(duì)已全面推出構(gòu)建CRISPR/Cas9敲除細(xì)胞系服務(wù),并構(gòu)建了小鼠消化道上皮細(xì)胞、小鼠前脂肪細(xì)胞、小鼠肝細(xì)胞以及豬、奶牛、羊消化道上皮細(xì)胞和乳腺上皮細(xì)胞等相關(guān)基因敲除的細(xì)胞系構(gòu)建。
CRISPR/Cas9簡(jiǎn)介
CRISPR/Cas9 是細(xì)菌和古細(xì)菌在長(zhǎng)期演化過(guò)程中形成的一種適應(yīng)性免疫防御機(jī)制,此系統(tǒng)成功被改造為第三代人工核酸內(nèi)切酶,可對(duì)多個(gè)基因同時(shí)編輯和敲除?;蚓庉嬵?lèi)型包括基因定點(diǎn)突變、基因移碼突變、基因定點(diǎn)整合、多位點(diǎn)突變和小片段的缺失。通過(guò)CRISPR/Cas9基因編輯,突變效率高、操作簡(jiǎn)單和成本低,已經(jīng)被廣大研究者應(yīng)用于基因編輯的研究。目前 CRISPR/Cas9 技術(shù)成功應(yīng)用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞、斑馬魚(yú)和小鼠以及細(xì)菌的基因組精確修飾,應(yīng)用最多的領(lǐng)域是基因敲除株系構(gòu)建和基因敲除動(dòng)物的研究?;蚓庉嫾夹g(shù)指能夠讓科研工作者對(duì)自己感興趣的基因進(jìn)行“編輯”,實(shí)現(xiàn)對(duì)特定DNA片段的敲除、加入等。自CRISPR/Cas9技術(shù)自問(wèn)世以來(lái),就有著其它基因編輯技術(shù)無(wú)可比擬的優(yōu)勢(shì),技術(shù)不斷改進(jìn)后,更被認(rèn)為能夠在活細(xì)胞中最有效、最便捷地“編輯”任何基因。如果想想研究某個(gè)基因的功能,可以對(duì)這個(gè)基因上設(shè)計(jì)多個(gè)gRNA,通過(guò)載體表達(dá)相應(yīng)的序列并結(jié)合基因組DNA,從而使Cas酶進(jìn)行有效切割,斷裂的基因組序列通過(guò)非同源末端連接來(lái)修復(fù),然而在修復(fù)的的過(guò)程中往往會(huì)產(chǎn)生DNA序列的插入或刪除,造成移碼突變,通過(guò)終止密碼子來(lái)終止基因表達(dá),從而實(shí)現(xiàn)基因敲除。
構(gòu)建CRISPR/Cas9敲除細(xì)胞系案例分析
服務(wù)說(shuō)明:
服務(wù)項(xiàng)目 |
服務(wù)周期(工作日) |
備注 |
細(xì)胞基因組提取 |
1 |
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PCR擴(kuò)增靶點(diǎn)附近目的基因和測(cè)序 |
7-10 |
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靶基因敲除載體構(gòu)建 |
10-14 |
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混合細(xì)胞靶基因敲除測(cè)序驗(yàn)證 |
5-7 |
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陽(yáng)性克隆篩選和驗(yàn)證 |
21-30 |
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Western blot(額外服務(wù)) |
7-14 |
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構(gòu)建CRISPR/Cas9敲除細(xì)胞系服務(wù)流程
客戶(hù)提供:
目標(biāo)細(xì)胞和敲除目的基因
服務(wù)流程:
訂單接收-簽定合同-基因敲除活性檢測(cè)-質(zhì)控-發(fā)貨。
如何訂購(gòu):
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