恒一生物科研技術(shù)團(tuán)隊(duì)已全面推出構(gòu)建永生化細(xì)胞系技術(shù)服務(wù)，可以使原代細(xì)胞轉(zhuǎn)化為正常的二倍體細(xì)胞，誘導(dǎo)細(xì)胞持續(xù)增殖，為基因編輯細(xì)胞系構(gòu)建、WB等實(shí)驗(yàn)提供細(xì)胞素材。本公司開發(fā)了致癌基因表達(dá)和基因編輯的兩種方法進(jìn)行細(xì)胞永生化服務(wù)。

永生化細(xì)胞系簡介

正常組織來源的細(xì)胞在體外培養(yǎng)條件下可發(fā)生增殖和分裂，然而，體外經(jīng)過有限次（1-3代）的傳代后，就會(huì)發(fā)生衰老和凋亡。但是，某些在體外培養(yǎng)的原代細(xì)胞經(jīng)過自發(fā)的或受外界因素的影響從衰老機(jī)制中逃離，從而具有無限增殖能力并可以無限傳代的細(xì)胞系稱為永生化細(xì)胞系。原代細(xì)胞自發(fā)永生化的幾率非常小，因此，通過基因轉(zhuǎn)染等技術(shù)將外源基因轉(zhuǎn)入原代細(xì)胞內(nèi)，從而建立永生化細(xì)胞系。

目前，人們已建立了多種細(xì)胞永生化的方法，包括：SV40病毒感染人和嚙齒動(dòng)物細(xì)胞后，病毒DNA隨機(jī)整合至宿主基因組，其早期區(qū)基因編碼的SV40T抗原可導(dǎo)致細(xì)胞的永生化，是建立永生化細(xì)胞株的常用方法之一。原代細(xì)胞端粒酶激活也能是某些細(xì)胞永生化。在原代培養(yǎng)的細(xì)胞中將人端粒酶催化亞基(hTERT)基因整合到基因組中能穩(wěn)定端粒的長度，使細(xì)胞易于永生化。然而，對(duì)于有些細(xì)胞，端粒酶激活后并不足以使細(xì)胞永生化，還需要借助SV40法。目前，已有許多嚙齒動(dòng)物細(xì)胞，如小鼠胚胎成纖維細(xì)胞和小鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞，已成功地被SV40T抗原永生化且被轉(zhuǎn)染的成纖維細(xì)胞傳代延長達(dá)20-30代。利用含端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶和SV40T抗原的重組逆轉(zhuǎn)錄病毒感染，對(duì)大鼠腸細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染，建立了永生化的細(xì)胞系。此外，也有研究者利用HPV16E6E7 轉(zhuǎn)染人子宮頸上皮細(xì)胞，建立了永生化的細(xì)胞系。盡管目前有多種細(xì)胞永生化的方法，但不同的方法不一定會(huì)使原代細(xì)胞永生化。由于細(xì)胞的物種來源和組織部位不同，其細(xì)胞增殖和凋亡機(jī)制也不盡相同，因此，每種原代細(xì)胞永生化的分子機(jī)制也不盡不同，其永生化細(xì)胞的方法也不同。

永生化細(xì)胞系特點(diǎn)

1、 能夠無限增殖；

2、 在一定傳代數(shù)范圍內(nèi)，保持正常二倍體染色體核型；

3、 能篩選單克隆細(xì)胞；

4、 構(gòu)建CRISPR/Cas9敲除細(xì)胞系。

永生化細(xì)胞系應(yīng)用

服務(wù)說明：

提供活力較強(qiáng)的原代細(xì)胞或委托恒一進(jìn)行原代細(xì)胞培養(yǎng)

最終交付：

兩瓶25cm²培養(yǎng)瓶的永生化細(xì)胞；

凍存的原代細(xì)胞3管；

永生化培養(yǎng)細(xì)胞圖片和COA報(bào)告。

服務(wù)流程：

訂單接收-簽定合同-永生化細(xì)胞系構(gòu)建-鑒定-發(fā)貨。

如何訂購：

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